У лиц, вакцинированных или подвергавшихся антибио-тикотерапии, встречаются морфологически нетипичные дифтерийные палочки. Бактериоскопия дает положительные результаты приблизительно в 30-50% случаев, в зависимости от опытности исследователя, метода окрашивания и свежести материала. Положительные стороны бактериоскопического метода диагностики следующие: 1) быстрота получения ориентировочного ответа, 2) сравнительно значительный процент положительных результатов, 3) возможность осуществления бактериоскопии в условиях, где нет бактериологической лаборатории. Отрицательный ответ при бактериоскопии не отражается на ходе дальнейшего анализа.
Выделение чистой культуры применяется с целью: 1) идентификации выделенной чистой культуры микроорганизма; 2)изучения типов дифтерийной палочки; 3) изучения токсигенности культуры или получения токсина.
Выделение чистой культуры производится на сывороточной среде Леффлера, свернутой в чашках Петри. Предлагаются заменители ее (желточно-сывороточная, желточно-молочно-агаровая и желточно-агаровая), с которых снимается не меньшее количество дифтерийных бактерий, чем со среды Леффлера. Недостаток этих сред заключается в том, что дифтерийные палочки вырастают в смешанной культуре с другими видами микробов. Это затрудняет выделение чистых культур дифтерийных бактерий. Практически более удобна среда Клаубера (кровяно-глицериновый агар с теллуритом калия), на которой вследствие редукции теллурита колонии дифтерийной палочки дают рост в виде колоний черного цвета.
Среда Леффлера представляет собой наиболее избирательную среду. Она способствует развитию дифтерийных палочек раньше сопутствующих микробов и, что наиболее важно, не изменяет морфологии палочек и их способности окрашиваться.
Сыворотка Леффлера представляет собой смесь трех частей сыворотки крови любого вида животного с одной частью нейтрального 1 % сахарного бульона с глюкозой. Смесь разливают в пробирки или чашки Петри и свертывают три дня подряд в аппарате Коха при. температуре 80-90°С в течение одного-полутора часов.