Центрифугирование производится при 2500 об/мин в течение получаса. Надосадочную жидкость повторно замораживают и оттаивают, повторяя этот цикл четыре-пять раз. Осадок удаляют центрифугированием; надосадочную жидкость консервируют мертиолатом в разведении 1 : 10 000. Эта жидкость служит антигеном, который можно использовать в течение четырех месяцев со дня приготовления, если хранить ее при температуре
Предложена методика получения комплементсвязывающего антигена из мозга новорожденных мышей, зараженных вирусом полиомиелита. В головном мозге новорожденных мышей содержится намного меньше липидов, чем в мозге взрослых животных, что повышает диагностическую ценность реакций (Дж. Казальс, П. Олитский, Р. Анслов). Отсутствие в обычных лабораториях неинфекционных, стойких антигенов мешает широкому применению серологических методов диагностики вирусных и риккетсиозных заболеваний.
Комплементсвязывающие антитела появляются позднее, чем нейтрализующие, при нейротронных вирусных заболеваниях титры их достигают 1 : 20- 1 : 50, исчезают эти антитела через несколько недель или месяцев; при риккетсиозах — титры антител достигают 1 : 1000 и выше, сохраняются у людей годами.
В реакции связывания комплемента принимают участие пять следующих компонентов: 1) специфический антиген, 2) специфическая сыворотка, 3) комплемент, 4) гемолитическая сыворотка и 5) бараньи эритроциты. Эта реакция может быть применена для определения антител при заранее известном специфическом антигене или для определения природы неизвестного антигена по известной сыворотке. Постановка РСК при вирусных заболеваниях в принципе не отличается от постановки ее при бактериальных заболеваниях.
Сыворотку больного инактивируют на водяной бане при температуре 56-58°С в течение 20 минут. Производят титрование гемолитической сыворотки. Затем титруют комплемент perse в присутствии ингредиентов реакции и только после этого ставят главный опыт.